實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物組織研磨方法步驟及注意事項(xiàng)
[導(dǎo)讀]:實(shí)驗(yàn)室對(duì)于動(dòng)物組織的研磨要使用科學(xué)的方法,以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確,本文就來(lái)詳細(xì)介紹實(shí)驗(yàn)室研磨動(dòng)物組織的方法步驟及相關(guān)注意事項(xiàng)。
在實(shí)驗(yàn)室中,某些對(duì)于動(dòng)物的研究課題試驗(yàn),往往需要先將動(dòng)物組織進(jìn)行研磨前處理,而手動(dòng)研磨不容易達(dá)到預(yù)期的研磨效果,不能獲取到合格的檢測(cè)樣品。實(shí)驗(yàn)室研磨動(dòng)物組織,我們可以借助專(zhuān)用的動(dòng)植物組織研磨儀器,簡(jiǎn)便且有效,下面天津東方天凈就來(lái)詳細(xì)介紹下動(dòng)物組織研磨方法步驟及注意事項(xiàng)。
TJG動(dòng)植物組織研磨儀
動(dòng)物組織研磨前處理步驟
一、實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備
1、在實(shí)驗(yàn)操作前,先將PBS緩沖液(磷酸緩沖鹽溶液,phosphate buffer saline)進(jìn)行4℃預(yù)冷,然后準(zhǔn)備若干冰塊備用。
2、使用75%濃度的乙醇溶液對(duì)鑷子、剪刀進(jìn)行消毒處理,如果還需對(duì)動(dòng)物組織進(jìn)行RNA提取,還要使用酒精燈對(duì)鑷子和剪刀進(jìn)行再次消毒,以盡可能消除RNA酶。
3、所有實(shí)驗(yàn)耗材都應(yīng)進(jìn)行高溫高壓滅菌,以保證各種酶不會(huì)對(duì)后續(xù)實(shí)驗(yàn)產(chǎn)生影響。
4、將2ml離心管置于冰塊上,并加入適量的PBS緩沖液,一般情況下,實(shí)驗(yàn)所需的組織勻漿的質(zhì)量體積比為10%(即0.1g組織樣本加入1ml液體)。
5、將需要進(jìn)行研磨的組織樣本從零下80℃的冰箱內(nèi)取出,置于冰上,使用滅菌后的鑷子和剪刀,將樣本切成小塊(每塊重量不宜超過(guò)0.02g,總重量不宜超過(guò)0.2g),然后放入加好相應(yīng)液體的離心管中,備用。
冰箱
6、取出已經(jīng)滅菌的氧化鋯研磨球,按照每個(gè)離心管一顆的數(shù)量,將鋯球放入離心管中。此過(guò)程需使用鑷子進(jìn)行該操作,并且盡量避免液體飛濺而導(dǎo)致樣本污染。
二、組織研磨
1、將放入樣品和鋯球的離心管標(biāo)記好編號(hào),然后放入專(zhuān)用的研磨適配器中,蓋好蓋子,將適配器固定在研磨機(jī)上。
裝有樣本的離心管
離心管編號(hào)
2、設(shè)置振動(dòng)頻率為1000次/分鐘,振動(dòng)時(shí)間為5分鐘。
TJS三維振動(dòng)球磨機(jī)
3、由于振動(dòng)過(guò)程中的撞擊和摩擦,會(huì)產(chǎn)生大量熱量,使得離心管溫度升高,所以可以選擇具有低溫控制功能的設(shè)備,或者將適配器放入液氮罐進(jìn)行預(yù)冷凍,并減少研磨時(shí)間,避免高溫對(duì)樣本的破壞。
三、組織上清的吸取及保存
1、將研磨完成后的離心管放入低溫環(huán)境下的高速離心機(jī)內(nèi),以4000rpm的速度離心30分鐘。
2、將所得的上清液用移液器取出,轉(zhuǎn)入至新的離心管內(nèi),并于零下80℃的環(huán)境長(zhǎng)期保存。
裝有上清液的離心管
動(dòng)物組織研磨前處理注意事項(xiàng)
1、需要研磨的樣本一定要在冰上操作,保證低溫環(huán)境,這樣可以降低樣本中蛋白質(zhì)(或RNA)的降解速度。
2、所有實(shí)驗(yàn)操作均需佩戴醫(yī)用口罩、手套,并且穿戴好實(shí)驗(yàn)服。
3、在進(jìn)行離心操作前,需要提前開(kāi)啟離心機(jī),讓離心機(jī)預(yù)冷,保持4℃左右的低溫環(huán)境。
4、研磨使用的氧化鋯研磨球一定不能多放,數(shù)量過(guò)多會(huì)導(dǎo)致管壁破裂,從而造成樣本丟失或污染。
5、使用移液器吸取上清液時(shí),不要吸取到沉淀。
附:實(shí)驗(yàn)所需儀器、工具及試劑
儀器:TJS三維振動(dòng)球磨機(jī)、低溫高速離心機(jī)
工具:研磨適配器、氧化鋯研磨球、移液器、手術(shù)用剪刀、2ml離心管、鑷子
動(dòng)物組織研磨適配器
試劑:PBS緩沖液、RIPA裂解液、75%濃度乙醇溶液、Trizol試劑
關(guān)于實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物組織研磨的方法步驟及相關(guān)注意事項(xiàng)就為大家介紹到這里了,使用東方天凈TJG-215動(dòng)植物組織研磨儀或TJS三維振動(dòng)球磨機(jī),搭配研磨適配器,就能將各類(lèi)動(dòng)物組織進(jìn)行快速有效的研磨。
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買(mǎi)球磨儀還是得買(mǎi)皮帶式傳動(dòng)那種,之前齒輪式傳動(dòng)的儀器噪音大的很,什么油封靜音,幾個(gè)月之后就不管用了,油干了,那些廠家售后也跟不上
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這個(gè)公司之前走的是小眾定制化路線,技術(shù)實(shí)力有保障,可以放心購(gòu)買(mǎi)
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